Novos iniciadores para detecção de Leishmania infantum pela reação em cadeia da polimerase

Resumo

Leishmania infantum causa leishmaniose visceral (LV) no Novo Mundo. O diagnóstico de LV é confirmado por testes parasitológicos e sorológicos, os quais nem sempre são sensíveis ou específicos. Nosso objetivo foi desenhar novos iniciadores para realizar uma Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para detecção de L. infantum. Sequências do DNA do minicírculo do cinetoplasto (kDNA) foram obtidos do GenBank, e os iniciadores FLC2/RLC2 foram desenhados. Amostras de DNA de L. infantum, Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis, Leishmania guyanensis, Leishmania naiffi, Leishmania lainsoni, Leishmania panamensis, Leishmania major e Trypanosoma cruzi foram usados para padronizar a PCR. PCR com iniciadores FLC2/RLC2 amplificou um fragmento de 230 pb e detectou 0,2 fg de DNA de L. infantum.Das espécies de parasitos analisadas, somente DNA de L. infantum foi amplificado. Após sequenciamento, o fragmento foi analisado no GenBank, que mostrou homologia com L. infantum. Em análises de amostras de sangue e lesão de cão com suspeita clínica de LV, a PCR detectou DNA de L. infantum. Em amostras de lesão de humanos e cães com leishmaniose cutânea, a PCR foi negativa. A PCR padronizada com os iniciadores FLC2/RLC2 mostrou alta sensibilidade e especificidade, sendo técnica promissora para o diagnóstico de LV.